Реферат на тему:


Воспользуйтесь поиском к примеру Реферат        Грубый поиск Точный поиск






Загрузка...
УДК 633

УДК 633.812.754: 578.083

Манушкина Т.Н., Николаевский государственный аграрный университет, г.. Николаев, Украина

Манушкина Татьяна Николаевна - кандидат сельскохозяйственных наук, доцент кафедры земледелия Николаевского государственного аграрного университета. Научные интересы сосредоточены в области биотехнологии, семеноводства, экологии, физиологии растений. Работает над научной работой на тему "Клональное микроразмножение растений".

Манушкин Н.Н., Государственная инспекция по карантину растений Украины по Николаевской области, г.. Николаев, Украина

Манушкин Михаил Николаевич - ведущий агроном, государственный инспектор по карантину растений Государственной инспекции по карантину растений Украины по Николаевской области. Круг научных интересов охватывает карантине растений, биотехнологии, овощеводство и цветоводство закрытого грунта.

ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕРОПРИЯТИЙ Оздоровление

LAVANDULA ANGUSTIFOLIA MILL

Впервые в Украине выявлено поражение растений лаванды вирусом INSV. Разработаны приемы оздоровления растений: культура меристем, термотерапия in vitro, химиотерапии. Установлено, что наиболее эффективным для освобождения растений лаванды от INSV является прием культуры меристем размером 0,2 мм.

First in Ukraine found out the defeat of plants of lavender by the virus of INSV. The receptions of making healthy of plants: culture of meristem, termoterapiya of in vitro, khemoterapiya are developed. It is set that most effective for releasing of plants of lavender from INSV there is a reception of culture by a meristem size 0,2 mm.

Вступление. На сегодня одной из основных причин уменьшения производительности промышленных насаждений лаванды является значительная пораженность растений инфекционными болезнями различной этиологии - грибковой (септориоз, фомоз стеблей, корневые гнили), микоплазменной (желтуха), вирусной и галловой нематодами [1, 2]. Эффективность культивирования плантаций, зараженных патогенами, снижается вследствие потерь урожая соцветий, которыедостигают 26-50%, ухудшение качества эфирного масла, вырождение и гибели отдельных кустов или целых участков [3]. Поскольку лаванда является многолетним растением, происходит накопление патогенов в агроценозах с каждым годом культивирования и их распространения при вегетативном размножении. Указанный процесс грозит устойчивому существованию агроэкосистем, поэтому возникает необходимость разработки приемов оздоровления посадочного материала лаванды.

Лаванда - приоритетная эфиромасличная культура, а также имеет важное экологическое значение, поскольку является эффективной противоэрозионной растением и лучше культурой для выращивания на рекультивированных землях.

Выгодная лаванда также тем, что культивируется в основном на недостаточно плодородных, щебнистых почвах, где другие культуры дают низкие урожаи [4].

Целью исследований было подобрать эффективные условия терапевтических приемов и изучить их влияние на регенерацию и освобождение от вирусной инфекции растений лаванды.

Материалы и методы. Для опытов отбирали растения лаванды без внешних симптомов инфекционных болезней. С целью выявления латентной вирусной инфекции донорные растения тестировали методами биотеста на рослинах- индикаторах [5] и иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA) [6] в косвенной (indirect ELISA) и сэндвич (DAS-ELISA) модификациях на 96-луночных полистироловых планшетах < / p>

( "Labsystems", Финляндия). Результаты регистрировали на автоматическом ELISA-ридере "Dynex Technologies» при длине волны 405 нм. За положительный результат принимали показатель экстинции, который превышал показатель отрицательного контроля в 2 раза. Для статистической достоверности каждый образец анализировали в 3 кратной повторности.

В опытах по оздоровлению растений лаванды как экспланты культивировали апикальные меристемы размером 0,2, 0,7 и 1,0 мм. Культивировали изолированные меристемы на питательной среде MC, дополненном кинетином (1,0 мг / л) и ГК (1,0 мг / л). Термотерапии в условиях in vitro подвергали микропагоны (не укоренившиеся

Наиболее четкие симптомы вирусного пораженияя были обнаружены на индикаторах Chenopodium amaranticolor и Gomphrena globosa, что согласуется с данными, приведенными в работе [2]. На растениях Chenopodium amaranticolor симптомы появлялись на 4-6-й день культивирования в виде мелких некрозов белого цвета до 1 мм в диаметре. При инфицировании растений Gomphrena globosa на 89-й день наблюдалось развитие некрозов диаметром 3-5 мм с каймой коричневого цвета. На растениях Petunia hybrida отмечено появление локальных хлоротичных пятен на 9-10-й день культивирования. У растений Cucumis sativus микророслины) и микророслины второго пассажа. Режим термотерапии: температура 37 ± 1 ° С, освещенность 2-3 клк / м2, фотопериод 16 часов, относительная влажность воздуха 60-70%. В опытах с химиотерапии использовали виразол (рибавирин, 1-Р-0-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид, "Sigma", Германия). Препарат добавляли в питательную среду MC, дополненного кинетином (1,0 мг / л) и гибберелловая кислотой (1,0 мг / л), в концентрациях 5,0, 10,0, 20,0 и 30,0 мг / л. На средах с Виразол культивировали меристемы размером 0,7 мм. Все эксперименты ставили в двукратной повторности, объем выборки составил 20 растений.

Результаты и обсуждение. В связи с тем, что первичным и наиболее экономичным способом получения здорового посадочного материала является отбор и размножение безвирусных растений, для проведения исследований нами было отобрано растения без внешних симптомов вирусного поражения, которые выращивали в условиях закрытого грунта. Для выявления возможной латентной инфекции было проведено биологическое тестирование на растениях-индикаторах:

Chenopodium amaranticolor, Gomphrena globosa, которые рекомендованы для накопления и поддержания в культуре вирусов лаванды [2], а также Cucumis sativus и Petunia hybrida Hort. Результаты тестирования подтвердили наличие латентной вирусной инфекции в отобранных растениях лаванды (табл. 1).

специфической реакции на инокуляцию соком лаванды не обнаружено.

Для идентификации вирусов в отобранных растениях рядованды применяли метод ИФА в косвенной и сэндвич модификациях. Данные анализа показали, что опытные образцы содержат антигены ГЫБУ, причем показатель экстинции сорта Синев (Е4о5 = 0,613 опт. Ед.) Был выше по сравнению с сортом Степная (Е405 = 0,445 опт. Ед.).

Растения-индикаторы для выявления поражения вирусом ГЫБУ является петуния, которую инфицируют с помощью трипса Егапкиипиеииа осепИаИИ5, в местах повреждения образуются белые некрозы, а через 2-3 дня вокруг них развивается коричневая каемка [7]. В наших исследованиях растения петунии также реагировали на инокуляцию соком лаванды, однако симптомы были другими - развивались хлоротичные пятна (см. Табл. 1). Такие различия симптомов могут быть обусловлены различными способами инфицирования (с помощью переносчика и механическое) [5]. Наличие симптомов на петунии, а также Гомфрена головчатая и результаты ИФА подтверждают поражения исследовательских растений лаванды вирусом INSV.

Показатель экстинции растительных экстрактов с сыворотками, специфичными к TMV, AMV, TRV, WSMV, BYDV, CMV и PVX, находился на уровне отрицательного контроля. Дальнейшие исследования мы проводили с выделенными растениями лаванды, в которых обнаружены латентную инфекцию, вызванную INSV.

детекции антигенов INSV в рослинах- регенерантов после применения приемов оздоровления культуры меристем, термотерапии in

Установлено, что у сорта Синев наибольшее количество здоровых растений можно получить методом культуры апикальных меристем размером 0,2 мм. Под действием химиотерапии с концентрацией Виразола 20,0 мг / л количество здоровых растений меньше в 3,5 раза при одинаковом количестве оздоровленных исходных растений (80,0%), что обусловлено ингибирующим действием Виразола на развитие микророслин. Достаточно высокий выход здоровых растений был получен под действием vitro и химиотерапии проводили методом косвенного ИФА. Выход безвирусных растений после проведения различных приемов терапии у сорта Синев колебался в незначительных пределах (60 - 80%), а у сорта Степная было получено 100% здоровых растений, целесообразно этиныть эффективность биотехнологических приемов с учетом их воздействия на регенерационные способность эксплантов. Комплексным показателем регенерационных процессов в микророслин является коэффициент размножения, который учитывает действие фактора на частоту регенерации, биометрические показатели и показывает потенциальное количество растений, которую можно получить после микроживцювання оздоровленных растений, прошедших терапию. Анализ данных, приведенных в табл. 2, показывает, что на выход здоровых растений после микроживцювання влияет генотип растения и способность к регенерации в культуре in vitro и под действием температуры 37 ± 1 ° С или Виразола.

термотерапии in vitro благодаря высокому коэффициенту размножения. У сорта Степная выход безвирусных растений не отличался при применении приемов культуры меристем и термотерапии in vitro.

Выводы. Таким образом, для освобождения растений лаванды от INSV наиболее эффективным является метод культуры апикальных меристем размером 0,2 мм, поскольку данный метод обеспечивает высокий выход здоровых растений (80,0 - 100,0%), а также не требует дополнительных денежных затрат на электроэнергию и оборудование термокамеры (для проведения термотерапии) или препарат виразол (для химиотерапии). Разработанные приемы термотерапии и химиотерапии могут быть применены для оздоровления лаванды, пораженной вирусами, от которых невозможно избавиться методом культуры апикальных меристем.

Авторы выражают искреннюю благодарность д.б.н. В.П. Полищуку и к.б.н. А.В. Шевченко за помощь в проведении иммуноферментного анализа.

ЛИТЕРАТУРА

Жукова JIM. Устойчивость различных сортов лаванды к септориозу // Труды ВНИИЭМК. - Симферополь, 1975. - Т. VIII. - С. 67-68.

Сенчугова H.A. Вирусные болезни основных эфиромасличных культур Крымского региона: Автореф. Дисс .... канд. биол. наук: 03.00.06 / КНУ им. Тараса Шевченко. - К, 2003. -21 с.

Чумак В.А., Подмарькова Н.М., Сенчугова H.A. Вирусные болезни лаванды и пути оздоровления посадочного материала // Сб. трудов ИЭЛР. - Т. XXIII. - Симферополь, 1992.- С. 48-54.

Эфиромасличное производство / Бугаенко JI.A., Назаренко Л.Г., Савчук Л.П. и др. // Научное обоснование основных направлений развития агропромышленного комплекса Крыма в условиях рыночного производства. - Симферополь: Таврия, 2004. - С. 64-79.

Практикум по общей вирусологии / Под ред. И.Г. Атабекова. - М.: Изд -во Моск. ун-та, 1981. — 192 с.

Антитела. - Кн. 2. Методы / Под ред. Д. Кэтти. - М., 1991. - С. 152-165.

Pundt L., Sanderson J., Daughtrey M. Petunias are your tip-off for TSWV // GrowerTalks. Nov. issue. - 1992.-P. 69-72.

Загрузка...