Реферат на тему:


Воспользуйтесь поиском к примеру Реферат        Грубый поиск Точный поиск






Загрузка...
ПУШКИНА ВАЛЕНТИНА АЛЕКСАНДРОВНА

Академия медицинских наук Украины

Институт микробиологии и иммунологии им. И.И.Мечникова

ПУШКИНА ВАЛЕНТИНА АЛЕКСАНДРОВНА

УДК: 616 - 036. 22: 616 022. 7: 579. 84 (Legionella): (1 - 21)

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ характеристика легионелл, циркулирующих НА ТЕРРИТОРИИ УКРАИНЫ, И НЕКОТОРЫЕ ПОДХОДЫ К РЕШЕНИЮ ПРОБЛЕМЫ легионеллеза

03.00.07 микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Харьков 2004

Актуальность темы исследования.

Работа выполнена в Украинском научно-исследовательском противочумном институте им. И.И. Мечникова.

Научный руководитель: |

доктор медицинских наук, старший научный сотрудник Степанкивский Лариса Дмитриевна, Украинский научно исследовательский противочумный институт им. И.И. Мечникова, ведущий научный сотрудник лаборатории медленных инфекций и ВИЧ / СПИДа

Официальные оппоненты: |

доктор медицинских наук, Бирюкова Светлана Васильевна, Харьковская медицинская академия последипломного образования МЗ Украины, профессор кафедры клинической иммунологии и микробиологии

доктор медицинских наук Доброштан Евгений Васильевич, Институт эпидемиологии и инфекционных болезней имени Громашевского АМН Украины, заведующий научно-организационным отделом

Ведущая организация: | Национальный медицинский университет им. Богомольца МЗ Украины

Защита состоится & ldquo; 04 & rdquo; Февраль 2005 в 11.00 на заседании Ученого совета Д 64.618.01 при Институте микробиологии и иммунологии
им .. И.И.Мечникова АМН Украины по адресу: 61057, г.. Харьков, ул .. Пушкинская, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института микробиологии и иммунологии им. И.И. Мечникова АМН Украины по адресу: 61057, г.. Харьков, ул. Пушкинская, 14.

Автореферат разослан & ldquo; 29 & rdquo; Декабрь 2004

Ученый секретарь

специализированного Ученого совета

к.мед.н.,вед.н.с. С.В Брусники

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. С каждым годом растет количество случаев легион-Лехсе и стран неблагополучных по этой инфекции. Так, если в Европе в 1993 году заболевания выявлены в 19 странах, то в 1998 году в 28, причем в 9 из них заре-естровано 32 вспышки. Показатель летальности составил 13,1% (Geneva: WHO, 1993-1998).

С момента первой вспышки легионеллеза (США, 1976) и выделения Legionella pneumophila (McDade J.E. et al., 1977) инфекция регистрируется повсеместно (Прозоровский С.В.из соавт., 1984). К настоящему времени описано более 42 видов легионелл, однако почти 90% случаев заболевания связано с Legionella pneumophila Philadelphia I (Тартаковский И.С., Синопальников А.И., 2001).

Летальность достигает 10 15%, а при нозокомиальной легионеллёзе - 35-40%. Восприимчивость к инфекции более 70% (Тартаковский И.С., 2001).

Легионеллёз типичный пример техногенных инфекций. Заражение происходит при вдыхании аэрозоля, образующегося при эксплуатации искусственных экосистем, и содержит инфицирующая дозу легионелл. Значимую роль в накоплении возбудителя играют используемые в конструкциях материалы. В биопленках на их поверхностях микроорганизмы более устойчивы к воздействию неблагоприятных факторов, включая дезинфектанты (Donlan R.M., 2001).

В настоящее время в США и большинстве стран Европы внедрена в практику клиническая и лабораторная диагностика легионеллеза. Определены основные резервуары инфекции (Flirmans C.B. et al., 1981, Тартаковский И.С., 2000), изучаются биологические свойства возбудителя, апробированы различные дезинфицирующие средства. На территории бывшего СССР исследования начались в 1979 году в России. В 1987 году в НДИЕМ им. М.Ф.Гамалеи организована лаборатория, получившая статус Центра ВОЗ по легионеллеза, где разработаны эффективные методы его диагностики, сконструированные питательные среды, проводится изучение биологии возбудителя (Тартаковский И.С., Синопальников А.И., 2001).

В Украине исследования по проблеме легионеллеза начаты в 1987 году на базе Одесской противочумной станции и уже первые результаты показали их актуальность (Могилевский Л.Я., Пушкина В.А. с соавт., 1989). После распада СССР эти работы были прекращены за исключением эпизодических исследований в Украинском научно-исследовательском противочумном институте. Несмотря на значительные успехи, достигнутые при изучении этой инфекции, проблема легионеллеза является актуальной и требует дальнейшего развития. Подтверждением этого является большая вспышка легионеллеза среди посетителей аукциона цветов в Голландии (1999), во время которого заболело 188 человек, а летальность составила 8,5% (Jeroen W. Den Boer et al., 2002) и вспышки в Испании, Франции, Норвегии и др. (Geneva: WHO, 1998-2002).

В Украине на сегодняшний день отсутствует система эпидемиологического надзора за легионеллеза. Для организации и проведения целенаправленных профилактических мероприятий необходимо изучить экологию региональных штаммов легионелл, их микробиологическую характеристику, выявить факторы, способствующие накоплению возбудителя, разработать подходы к деконтаминации искусственных экосистем. Изучение роли легионелл в возникновении пневмоний и ОРЗ на территории Украины будет способствовать своевременной постановке этиологического диагноза и назначению адекватного этиотропного лечения.

Св Связь работы с научными темами. Работа выполнялась на базе Одесской противочумной станции (1986-1991рр.) В рамках программы "Легионеллёз". В 2001 году исследования восстановлены в Украинском научно-исследовательском противочумном институте в соответствии с плановой научной темы: "эпидемиолого-экологические аспекты легионеллеза в условиях мегаполиса" (гос. Регистрационный № 0102U001225).

Цель работы. Выявить циркуляцию легионелл и их этиологической значимости в инфекционной патологии человека на территории Украины; охарактеризовать биологические свойства региональных штаммов, оценить эффективность химической и биотехнологической дезинфекции в предупреждении легионеллеза.

Задачиисследования:

1. Провести аналитическую оценку эпидемиологических особенностей легионеллеза, микробиологической и экологической характеристики легионелл, их влияния на возникновение заболеваемости.

2. Установить этиологической роли легионелл в заболеваемости пневмониями и ОРЗ в Украине (в условиях отдельных регионов - мм.Одеса, Николаев).

3. Провести поиск штаммов легионелл в природных и искусственных экосистемах.

4. Изучить фенотипические, биохимические, серологические, биологические характеристики штаммов легионелл, циркулирующих на территории Украины.

5. В эксперименте изучить влияние рельефа поверхности полимерных материалов на сорбцию легионелл.

6. Определить эффективность действия современных дезинфектантов в отношении штаммов легионелл, сорбированных на поверхностях полимерных материалов.

7. В модельных условиях изучить возможность использования биотехнологии предотвращения биообрастания систем оборотного водоснабжения для снижения концентрации легионелл в искусственных водных экосистемах.

Научная новизна исследований. Впервые в Украине расшифрованы и описаны вспышки и спорадические случаи легионеллеза. Впервые на территории Украины выделены штаммы легионелл, охарактеризованы их биологические свойства. Показано, что рельеф поверхности полимерных материалов влияет на сорбцию и накопления на них легионелл. В условиях модели доказана перспективность использования "Cпособ предотвращения биообрастания в системах оборотного водоснабжения" для профилактики легионеллеза.

Практическое значение полученных результатов. Результаты данной работы обосновывают необходимость: подготовки специалистов и внедрения в практику работы бактериологических лабораторий отделов особо опасных инфекций Украины методов исследований легионеллезом;

- внедрение на территории Украины в комплекс обследования больных атипичные пневмонии и ОРЗ с тяжелым клиническим течением диагностических исследований легионеллезом;

-включение в план медицинской подготовки плавсостава занятий по лечению и профилактике легионеллеза;

- выявленния объектов группы риска легионеллеза с целью проведения на них мониторинга и осуществления профилактических мероприятий.

Разработан «Способ оценки бактерицидной активности дезинфицирующих средств", который позволяет получать адекватные результаты в отношении микроорганизмов, сорбированных на полимерных материалах (декларационный патент на изобретение № 59903 от 15.09.2003), и может применяться для оценки бактерицидной активности новых дезинфектантов и выбора средств для проведения целенаправленной дезинфекции искусственных экосистем.

С учетом полученных данных подготовлен проект приказа по МЗ Украины и методические рекомендации по организации эпиднадзора и лабораторной диагностики легионеллеза, составленные и разосланы информационные письма.

Личный вклад соискателя. Автор самостоятельно провела научно-информационный поиск, сформулировала цели и задачи исследования, определила методологические подходы, отработала экспериментальные модели исследований. Самостоятельно проанализированы данные литературы по эпидемиолого экологических аспектов легионеллеза, микробиологической характеристики легионелл, методов лабораторной диагностики. Принимала непосредственное участие в расшифровке вспышек легионеллеза, установлении етиологогичнои роли легионелл в возникновении пневмоний и ОРЗ на территории Украины. Изучала распространения легионелл в природных и искусственных экосистемах, впервые в Украине выделила культуры легионелл. Самостоятельно проведено изучение микробиологических свойств региональных штаммов, экспериментальную работу по исследованию сорбции легионелл на полимерах с разным рельефом поверхности и эффективности действия дезинфицирующих средств в отношении штаммов, сорбированных на этих материалах. Вместе с соавторами разработан "Способ оценки бактерицидной активности дезинфицирующих средств". Самостоятельно изучена возможность использования биотехнологического метода для снижения концентрации легионелл в искусственных экосистемах. Статистическая обработка, научный анализ результатов, обоснование выводов и рекомендаций выполнены непосредственно дисертантом.

Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертационной работы докладывались на научно-практической конференции "Санитарная охрана Украины и профилактика особо опасных инфекций" (г.. Одесса, 1997), совещании семинаре по актуальным вопросам лабораторной диагностики особо опасных инфекций (Киев-Винница, 2000), международной научной конференции "Экология и биогеохимическая деятельность микроорганизмов" (Одесса, 2001), IV международной научно-практической конференции "Вода и здоровье 2001" (Одесса, 2001), международной научно-практической конференции "Актуальные вопросы стратегии, тактики, применения и исследования антисептиков, антибиотиков" (Винница, 2002), всеукраинском с езде санэпидслужбы, посвященном ее 80 летию и памяти памяти академика Л.В.Громашевского (Киев, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 работ, в том числе 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Украины, получен патент на изобретение.

Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на 118 страницах текста. Он состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3-х основных разделов собственных исследований, анализа и обсуждения полученных результатов, выводов, рекомендаций. Список литературы содержит 145 источников. Работа включает 14 таблиц и 12 рисунков.

Основное содержание работы

Материалы и методы исследования. За периоды 1987 по 1991 и 2000-2003 годы исследована иммунологическая структура населения на наличие специфических антител к Legionella pneumophila Philadelphia I - тестировано 2686 донорских сывороток крови различных контингентов: гражданские лица, военнослужащие, члены экипажей судов (г.. Одесса). С диагностической целью обследовано 1383 больных пневмонией и острыми респираторными заболеваниями (гг. Одесса, Николаев, Донецк, Сумская область), исследованы 62 пробы секционного материала (биоптаты легких). Для изучения циркуляции легионелл в объектах окружающей среды проанализированы 1446 проб. Полученная характеристика биологических свойств 32 штаммов легионелл, изолированных из природных и искусственных экосистем на территории Украины.

Изучена сорбция легионелл на 6 образцах полимеров с различным профилем рельефа поверхности. Проведена оценка эффективности дезинфицирующих средств по легионелл, сорбированных на полимерных материалах, с помощью разработанного нами способа.

В модельных опытах изучена возможность применения биотехнологии "способ предотвращения биообрастания в системах оборотного водоснабжения" для снижения концентрации легионелл в искусственных водных экосистемах.

Для достижения поставленных в работе задач использован комплекс методов:

1.Имунологичний (серологический) метод применяли при обнаружении антител к Legionella pneumophila Philadelphia I в реакции непрямой иммунофлуоресценции, объемной агломерации и иммуноферментном анализе. Для выявления легионелл в клиническом материале и объектах окружающей среды применяли реакции прямой иммунофлуоресценции и иммуноферментный анализ. С целью серологической идентификации выделенных штаммов - реакции агглютинации и прямой иммунофлуоресценции.

2.Бактериологичний метод использовали для выделения культур легионелл, накопления культуральной массы, хранения коллекционных штаммов легионелл.

3.Биохимични методы использовали для идентификации при изучении биохимической активности выделенных культур.

4.Биологичний метод применяли при изучении вирулентности выделенных культур.

5.Цитоморфологичний метод использовали при изучении цитопатогенного действия легионелл на культуру клеток Нер-2

6.Методы клинико-эпидемиологического анализа применяли для расшифровки вспышек и спорадических случаев заболевания легионеллезом.

7.Статистичний метод использовали для обработки полученных данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение экологии легионелл и их роли в инфекционной патологии на территории Украины. Поиск легионелл проводили в искусственных и природних экосистемах (табл.1).

Таблица 1

Выделение бактерий рода Legionella на различных объектах г.. Одессы

Объект исследования | Место отбора проб | Кол-во проб | Кол-во штаммов

Абс. | % ± (95)

ТЭЦ | Механические угольные фильтры | 24 | 4 | 16.67 ± 14.91 | Железнодорожный транспорт | Накопительные резервуары воды, питьевые титаны | 45 | 3 | 6,66 ± 7,28 | Объекты с системами рециркуляторного типа | Оборотные реформинга

градирни | 65 | 5 | 7.69 ± 3.30

Другие пром. объекты | Системы кондициювання133 | 2 | 1.50 ± 2.07 | Коммунальные объекты | Фонтаны, бассейны, душевые | 17 | 1 | 5.88 ± 11.19 | Природные экосистемы | Открытые водоемы (р.р.Дунай, Днестр) | 163 | 7 | 4.29 ± 1.59

Самый высокий степень обсемененности отмечен в пробах ТЭЦ и предприятиях, включающих в технологический цикл водные системы рециркуляторного типа. Приведенные данные свидетельствуют о том, что реки Дунай и Днестр являются естественной экологической нишей легионелл. При попадании воды из них в искусственные экосистемы с соответствующими условиями формируются резервуары возбудителя.

Полученные результаты по распространению легионелл обусловили необходимость установления их этиологической роли в инфекционной патологии на территории Украины. Скрининговыми исследованиями имуноструктуры населения Одессы обнаружили антитела в различных титрах к L.pneumophila Philadelphia I - в 2.26 ± 0.57% случаев. При обследовании больных пневмонией и ОРЗ на территориях городов Одессы и Николаева этиологическая роль L.pneumophila Philadelphia I обнаружена соответственно в 4.85 ± 1.25% и 2.82 ± 1.14%. При изучении 62-х образцов секционного материала в 6 из них (9.68 ± 7.36%) методом прямой иммунофлуоресценции найдены легионеллы.

Особое внимание было уделено проблеме легионеллеза судах. Специфика морского транспорта - продолжительность рейсов, изменение климатических поясов, заходы в порты с неблагополучной эпидситуацией способствует разнообразию судовой микробиоты. В связи с этим нами проведены исследования, направленные на выявление легионелл и изучения их етиологичуднах, 1 на промышленном объекте в Сумской области, 1 в общежитии м. Донецк и семейный вспышка в г.. Одессе. Суммарно зарегистрировано 52 случая заболевания.

На судах в целом заболел 31 человек. Во время 2-х вспышек ОРЗ на сухогрузных судах заболели 14 членов экипажа. На пассажирском судне были зарегистрированы пневмонии у пассажирки и 16 членов команды. При проведении ретроспективного эпидрасследование вспышек ОРЗ в сыворотках крови всех переболевших методом непрямой иммунофлуоресценции обнаружены антитела к L.pneumophila Philadelphia I в титрах от 1: 32 до 1: 128 (диагностический). На одном сухогрузе обнаружили антиген L.pneumophila Philadelphia I в 2-х смывах с раструбов кондиционеров, на другом - результаты исследования были отрицательными. На пассажирском судне при исследовании сывороток крови переболевших специфические антитела найдены в диагностических титрах. Антиген L.pneumophila Philadelphia I обнаружили в смывах из спорыньи кондиционеров воздуха в каютах переболевших. Подача воздуха в данные помещения происходила одним рукавом кондиционера. С конденсата системы кондиционирования выделили культуры L.pneumophila Philadelphia I.

В период вспышки болезни легионеров на промышленном объекте в Сумской области пневмонией заболели 13 человек. При серологических исследованиях в сыворотках крови переболевших обнаружили антитела к L.pneumophila Philadelphia I в диагностических титрах с нарастанием при повторных анализах. Заражение происходило при вдыхании аэрозоля, образовавшегося в результате затопления термальными сточными водами повитрогонив вытяжной вентиляции, где методом прямой иммунофлуоресценции обнаружили легионеллы.

Вспышка легионеллеза зарегистрировано в общежитии м. Донецк. Трое учащихся при отсутствии горячей воды умывались водой из отопительной батареи. Все заболели тяжелой формой пневмонии. Методом иммуноферментного анализа в них обнаружили антитела к L.pneumophila Philadelphia I с нарастанием титров при повторных анализах до 1: 1600 1: 3200 В воде из батарее выделили культуру L.pneumophila Philadelphia I.

Во время семейного вспышки в Одессе в течение 2-х недель пневмонией заболели сестры 8 и 13 лет, их мать и родственник 16 лет. В течение 3-х недель больные получали массивную антибиотикотерапию. Затем были госпитализированы с диагнозом "легионеллеза?». Сыворотки крови поступивших на исследование в поздние сроки. Однако, двумя методами (косвенная иммунофлуоресценция и реакция объемной агломерации) антитела к L.pneumophila Philadelphia I обнаружили в диагностических титрах. У родственника специфические антитела обнаружили через месяц после выздоровления (он выезжал из Одессы) в зело диагностического титра. Больные постоянно находились в своем частном доме, где с смыва с головки душа и шланга капельного орошения и водяного аэрозоля из него были выделены культуры L.pneumophila Philadelphia I.

Эпидемиологическое расследование спорадических заболеваний легионеллеза только в отдельных случаях позволяет выявить резервуар инфекции. Нами проведено эпидемиологическое расшифровки 2-х спорадических случаев легионеллеза. Больному К., 27 лет при поступлении был поставлен диагноз "легионеллез?", В дальнейшем подтвержден лабораторными исследованиями. Он проживал над подвалом, где из-за повреждения сети теплоснабжения постоянно застаивалась горячая вода. В результате воздействия влаги пришло в негодность линолеумное покрытие в квартире. В смывах с прилегающей

Загрузка...

Страницы: 1 2